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關(guān)于間充質(zhì)

干細胞三系誘導(dǎo)染色分析

一、MSC三系誘導(dǎo)基本介紹

干細胞是一種未充分分化、尚不成熟的細胞，在適當(dāng)條件下，具有再生各種組織、器官的潛能，因此被寄予厚望，干細胞研究也多次進入國自然研究熱點排行榜。間充質(zhì)干細胞（MSC）具有多向分化的潛能，體外在一定條件下可以誘導(dǎo)分化為脂肪細胞、成骨細胞、成軟骨細胞，2006年國際細胞治療協(xié)會（ISCT）確定此三項檢測指標(biāo)是MSC鑒定的必檢項目，MSC的三系誘導(dǎo)在生物醫(yī)藥領(lǐng)域一直深受各位科研人員的青睞和應(yīng)用。

二、MSC三系分化檢測手段

“成脂分化"

間充質(zhì)干細胞成脂分化有兩個階段，先是MSC分化為脂肪前體細胞，接著在特定的細胞刺激影響下（如C/EBPs和PPAR-γ）最終分化為脂肪細胞，出現(xiàn)脂肪細胞中顯著的標(biāo)志物（脂肪滴）。對于脂滴染色，經(jīng)常采用油紅O染色方法對脂滴進行染色，其原理為油紅O可進入脂滴與其特異性結(jié)合將其染成紅色。我司有多款油紅O染色試劑盒，分別適配于組織和細胞樣本，用于細胞染色常推薦G1262，染色后結(jié)果可通過圖像處理軟件進行分析，如果想用于后續(xù)定量分析，可以染色后用無水異丙醇或乙醇浸泡細胞3-5min進行顏色提取，用離心管收集溶出的溶液，分取1ml稀釋一定倍數(shù)進行紫外分光光度法測量520nm處的OD值。除此之外我們還擁有熒光法試劑盒（內(nèi)含核染料）用于脂滴染色，結(jié)果對比清晰，染色靈敏。

染色示例

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“成骨分化"

MSC成骨分化分為兩個時期，誘導(dǎo)初期會有堿性磷酸酶（ALP）的高度表達，作為成骨細胞分化成熟的早期標(biāo)志，可通過固藍染色來鑒別。誘導(dǎo)后期，成熟的成骨細胞表達ECM鈣化相關(guān)蛋白，長時間的成骨誘導(dǎo)使鈣離子以鈣鹽方式沉淀下來，形成“骨結(jié)節(jié)"。骨結(jié)節(jié)可通過茜素紅S染色（茜素紅和鈣發(fā)生顯色反應(yīng)），把外面沉積的鈣結(jié)節(jié)染成深紅色，通過著色物面積和深淺來表示成骨分化的強弱。

對于茜素紅染色，我們2024年上新了可以提取鈣鹽染色的輔助試劑-CPC（G1453），以及染色劑+提取劑的試劑盒套裝（G3283），在完成茜素紅染色后，加入提取試劑室溫孵育15-30min使茜素紅染色充分溶解，用離心管收集溶出的溶液，分取100ul或200ul置于96孔板條內(nèi)用酶標(biāo)儀測量560nm處的OD值，從而半定量鈣鹽含量。

染色示例

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“成軟骨分化"

MSC成軟骨分化可分為兩個時期，首先MSC聚集成團，成團的中間細胞經(jīng)分裂分化轉(zhuǎn)變成一種大而圓的細胞，即成軟骨細胞。然后成軟骨細胞繼續(xù)分化產(chǎn)生基質(zhì)和纖維，不斷交織形成軟骨球狀，可通過阿利新藍來進行鑒別染色，阿利新藍與軟骨基質(zhì)中的多糖結(jié)合，使軟骨細胞和基質(zhì)呈淺藍色或藍綠色。若想對軟骨含量定量分析，可以使用G1567-阿利新藍染色提取試劑在阿利新藍染色后進行溶解提取顏色，室溫孵育1-2h即可，用離心管收集溶出的溶液，分取100μL或200μL置于96孔板條內(nèi)用酶標(biāo)儀測量620nm處的OD值，從而達到半定量軟骨含量目的。

染色示例

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