多酚氧化酶(PPO)測試盒的整個測試過程大約只需50分鐘即可完成，并且一次可以測定約100例樣本，大大提高了工作效率。每個樣本僅需取100微升(ul)，減少了試劑消耗的同時降低了對珍貴樣本的需求。試劑盒可以在2～8℃的條件下保存長達(dá)6個月仍然有效，保證了長期使用的可行性和數(shù)據(jù)的一致性。變異系數(shù)CV=1.7.表明該測試方法具有較高的重復(fù)性和可靠性，意味著不同批次間的實(shí)驗(yàn)結(jié)果較為一致。
 

　　由于采用了優(yōu)化設(shè)計(jì)的試劑配方，使得檢測限更低，同時背景干擾小，從而提高了檢測的準(zhǔn)確性；適用于多種類型的生物樣本，包括組織、血清、血漿及相關(guān)液體樣本，為科研工作者提供了便利。在生物學(xué)研究、食品工業(yè)等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。它不僅簡化了復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)操作，提高了工作效率，而且確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

 

　　多酚氧化酶(PPO)測試盒的測定步驟：
 

　　1.樣品準(zhǔn)備
 

　　-取材與研磨：選取新鮮的植物組織或其他含PPO的材料，迅速置于預(yù)冷的研缽中，加入適量的提取緩沖液(通常由試劑盒提供或按要求配制)，在低溫環(huán)境下充分研磨成勻漿。注意盡量保持操作過程在冰上進(jìn)行，以減少酶活性的損失。
 

　　-離心分離：將研磨好的勻漿轉(zhuǎn)移到離心管中，使用臺式離心機(jī)在一定轉(zhuǎn)速下離心一定時間，使細(xì)胞碎片等雜質(zhì)沉淀下來，得到上清液即為粗酶提取液。如果懸浮細(xì)胞用此法時必須經(jīng)離心后才能吸出上清再加二甲基亞砜(DMSO)。
 

　　2.反應(yīng)體系構(gòu)建
 

　　-添加底物和緩沖液：按照試劑盒說明書的要求，向比色皿或試管等反應(yīng)容器中依次加入特定的底物(如鄰苯二酚)、適量的反應(yīng)緩沖液以及一定量的粗酶提取液。不同品牌的測試盒可能會有不同的配方和用量要求，需嚴(yán)格按照說明操作。
 

　　-混勻并保溫：輕輕混勻反應(yīng)體系中的各種成分，然后將反應(yīng)容器放置在適宜的溫度條件下(一般為室溫或特定的恒溫水浴鍋中)進(jìn)行保溫孵育，讓酶與底物充分接觸并發(fā)生反應(yīng)。
 

　　3.吸光度測定
 

　　-選擇波長：根據(jù)該測試盒的原理，PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌，后者在525nm處有特征光吸收。使用可見分光光度計(jì)在此波長下測量反應(yīng)體系的吸光度值。
 

　　-定時讀數(shù)：在規(guī)定的時間節(jié)點(diǎn)(通常是每隔一段時間)讀取一次吸光度值，記錄數(shù)據(jù)。通過測量單位時間內(nèi)吸光度的變化量來計(jì)算PPO的活性。
 

　　4.數(shù)據(jù)處理與分析
 

　　-繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(若有對照品)：如果試劑盒配備了已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品測得的數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)樣品的吸光度值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對應(yīng)的酶活性單位。
 

　　-計(jì)算結(jié)果：根據(jù)公式和所測得的數(shù)據(jù)計(jì)算出樣品中PPO的活性，并對結(jié)果進(jìn)行分析和比較。