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檸檬酸合酶試劑盒基礎(chǔ)介紹

更新時(shí)間:2023-04-21  |  點(diǎn)擊率:2107
  一、檸檬酸合酶(CS)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是細(xì)胞內(nèi)多種代謝途徑的關(guān)鍵限速酶及代謝變化的標(biāo)志酶,具有高度底物特異性,僅催化乙酰CoA和草酰乙酸縮合生成檸檬酸和輔酶A,作為三羧酸循環(huán)第一個(gè)限速酶,是該途徑主要調(diào)控位點(diǎn)之一。檸檬酸合酶催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶A,進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸,DTNB轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的TNB,產(chǎn)物在412nm處具有特征吸收峰,根據(jù)吸光值變化即可表征檸檬酸合酶的活性。
 
  二、使用前每支加入500µL蒸餾水充分溶解(未使用完的試劑-20℃保存);使用前每支加入1.5mL蒸餾水充分溶解(未使用完的試劑-20℃保存)。測(cè)定過(guò)程中所需要的儀器和試劑:可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿(光徑10mm)、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。
 
  三、推薦使用樣本蛋白濃度計(jì)算酶活,若用樣本質(zhì)量計(jì)算,則需加測(cè)胞漿提取物CS活性,上清(胞漿提取物)和沉淀(線粒體)酶活之和即為總酶活;準(zhǔn)確在10s和130s處完成讀數(shù),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性;測(cè)定過(guò)程中待測(cè)樣本和所有試劑須冰上放置,以免變性和失活;計(jì)算?A測(cè)定=A2測(cè)定-A1測(cè)定,?A對(duì)照=A2對(duì)照-A1對(duì)照,?A=?A測(cè)定-?A對(duì)照。

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